生物透射電鏡(TEM)作為現(xiàn)代生物學(xué)研究的重要工具，能夠高分辨率地揭示細(xì)胞、組織等生物樣品的內(nèi)部超微結(jié)構(gòu)。本文將詳細(xì)介紹生物透射電鏡服務(wù)的具體步驟及檢定過程中需要注意的事項(xiàng)。
一、生物透射電鏡服務(wù)具體步驟
需求溝通與評估
客戶與透射電鏡測試機(jī)構(gòu)進(jìn)行在線或電話咨詢，明確具體的檢測需求和目標(biāo)。
機(jī)構(gòu)專業(yè)人員根據(jù)客戶需求提供詳細(xì)的檢測方案和建議，并進(jìn)行樣品評估，確保樣品適合進(jìn)行透射電鏡觀察。
樣品準(zhǔn)備
取材：快速、準(zhǔn)確地從生物體中取材，組織塊大小一般控制在1mm³左右，確保樣品新鮮且無污染。
固定：采用戊二醛等固定劑對樣品進(jìn)行固定，保護(hù)樣品結(jié)構(gòu)，防止自溶和降解。固定時間根據(jù)樣品特性而定，通常需固定數(shù)小時至過夜。
脫水：使用逐級濃度的酒精或丙酮對樣品進(jìn)行脫水處理，確保樣品脫水，便于后續(xù)包埋。
包埋：將脫水后的樣品包埋于樹脂等包埋劑中，通過聚合反應(yīng)使包埋劑固化，形成適合切片的樣品塊。
超薄切片
使用超薄切片機(jī)將包埋好的樣品塊切成厚度約為50-100nm的超薄切片。切片過程需精細(xì)操作，避免切片破損或變形。
染色
對超薄切片進(jìn)行重金屬離子染色(如鈾鹽和鉛鹽)，增強(qiáng)樣品結(jié)構(gòu)的電子散射能力，提高圖像對比度。
電鏡觀察與圖像采集
將染色后的超薄切片放入透射電鏡中，調(diào)整電鏡參數(shù)(如加速電壓、放大倍數(shù)等)，對樣品進(jìn)行觀察并采集高質(zhì)量圖像數(shù)據(jù)。
圖像分析與報(bào)告出具
對采集到的電鏡圖像進(jìn)行詳細(xì)的量化和分析，提取出有關(guān)樣品內(nèi)部結(jié)構(gòu)的關(guān)鍵信息。
根據(jù)客戶需求和目的，對分析結(jié)果進(jìn)行解釋和說明，并出具詳細(xì)的檢測報(bào)告。
二、檢定過程中需要注意的事項(xiàng)
樣品準(zhǔn)備質(zhì)量
確保樣品在取材、固定、脫水和包埋等步驟中操作精細(xì)，避免對樣品造成機(jī)械損傷或化學(xué)污染。
嚴(yán)格控制固定和脫水時間，確保樣品結(jié)構(gòu)完整且脫水。
超薄切片技術(shù)
切片過程需精細(xì)操作，確保切片厚度均勻、無破損和變形。
使用高質(zhì)量的超薄切片機(jī)和切片刀，提高切片質(zhì)量和效率。
染色效果
染色過程需嚴(yán)格控制染色劑濃度和染色時間，避免染色過深或過淺影響圖像質(zhì)量。
染色后需充分清洗切片以去除多余染色劑。
電鏡操作環(huán)境
保持電鏡操作環(huán)境清潔無塵、無震動、無電磁干擾，確保電鏡穩(wěn)定運(yùn)行和圖像質(zhì)量。
定期清潔和維護(hù)電鏡設(shè)備，延長設(shè)備使用壽命并提高觀測效果。
參數(shù)設(shè)置與校準(zhǔn)
根據(jù)樣品特性和觀察需求合理設(shè)置電鏡參數(shù)(如加速電壓、放大倍數(shù)等)。
在觀察前進(jìn)行必要的校準(zhǔn)操作(如光闌校準(zhǔn)、像散校準(zhǔn)等)，確保圖像清晰度和分辨率。
安全注意事項(xiàng)
操作人員需佩戴防護(hù)眼鏡和手套等個人防護(hù)裝備，避免長時間暴露在電子束輻射下。
遵守實(shí)驗(yàn)室安全規(guī)程，確保設(shè)備和人員的安全。
生物透射電鏡服務(wù)涉及多個精細(xì)步驟和注意事項(xiàng)。只有嚴(yán)格按照操作規(guī)范進(jìn)行樣品準(zhǔn)備、切片、染色和電鏡觀察等操作，才能獲得高質(zhì)量的觀測結(jié)果并確保電鏡設(shè)備的長期穩(wěn)定運(yùn)行。隨著技術(shù)的不斷進(jìn)步和應(yīng)用領(lǐng)域的擴(kuò)展，生物透射電鏡將在生命科學(xué)研究中發(fā)揮更加重要的作用。
